Приспособления и посуда для посевов микроорганизмов
При посевах консервов на стерильность пользуются стеклянными трубками диаметром 0,5-0,6 см и длиной 35-40 см. При других работах по выделению микроорганизмов используют платиновые петли, иглы, шпатели (рис. 46 и 47). Вместо платиновой проволоки для изготовления игл и петель можно использовать хромоникелевую проволоку диаметром 0,5 мм. Проволока длиной около 7-8 см вставляется в специальный держатель или впаивается - в стеклянную палочку длиной 20-22 см. Свободный конец проволоки для иглы остается прямым. Для того чтобы получить петлю, конец иглы загибается, получается кружок диаметром 1,5-2 мм.
Для равномерного распределения посевного материала на плотной питательной среде изготовляют специальные шпатели из стеклянных палочек толщиной 4-5 мм и длиной около 30 см. Один конец такой палочки сгибают над пламенем горелки под прямым углом или в виде треугольника.
Для заражения сред жидким материалом и отбора проб жидкостей используются различные химические пипетки, стеклянные трубочки и пастеровские пипетки. Пастеровская пипетка представляет собой трубочку, один конец которой оттянут в капилляр длиной 10-12 см. Конец капилляра запаян. Пипетки и стеклянные трубочки перед стерилизацией закрывают ватой с того конца, который берут в рот. Длина такой ватной пробки должна быть 3 см. Ватные пробки, закрывающие пипетки, не должны быть очень плотными, но и не должны свободно двигаться в них. Нельзя, чтобы волокна ваты торчали из трубок и пипеток, так как это не даст возможности плотно зажать отверстия пипеток пальцем. Для регулирования быстроты вытекания жидкости концы трубок и пипеток со стороны ватной пробки зажимают указательным пальцем и приоткрывают лишь настолько, чтобы вытекание происходило медленно.
Для выращивания микроорганизмов на жидких питательных средах применяют бактериологические пробирки (без ранта, длиной 16 см и диаметром 16 мм). Для твердых питательных сред используются плоские двойные чашки Петри, состоящие из двух половинок разного диаметра (рис. 48). В половинку с меньшим диаметром вносится питательная среда. Другая половинка, большего диаметра, служит крышкой.
Приготовленные питательные среды для стерилизации разливают в пробирки, колбы, флаконы и закрывают их ватными пробками. Ватные пробки служат фильтром для воздуха и предохраняют среды от высыхания. Они должны быть достаточно плотными с равномерным распределением волокон и в то же время, не должны сильно задерживать газообмен между культурой и наружным воздухом. Слишком рыхлые пробки, через которые воздух беспрепятственно проходит в сосуд и пробки, едва закрывающие отверстие сосуда, совершенно непригодны. Непригодны и слишком плотные пробки, затрудняющие аэрацию. Длина пробки для пробирки должна быть до 4 см. Для колбочек пробки делаются соответствующего диаметра и примерно такой же длины. В сосуд пробка помещается наполовину ее высоты.
Для приготовления ватных пробок берут плоский кусок ваты длиной 50-60 см, аккуратно раскладывают его на столе и, смачивая поверхность ваты водой, скатывают полоску от себя валиком (рис. 49). Вату следует распределять равномерно и хорошо укатывать по размеру диаметра сосуда. Затем валик подсушивают и режут острым ножом на отрезки длиной 4 см. Каждый отрезок обертывают кусочком марли в один слой, скрепляя концы марли сверху ниткой (рис. 50).
Мойка бактериологической посуды. Бактериологическую посуду, бывшую в употреблении, кипятят в течение часа в воде с добавлением мыла и моющего средства «Прогресс». На 10 л воды берется полкуска хозяйственного мыла и 3-4 столовые ложки моющего средства. Можно использовать только одно мыло, но тогда его нужно брать больше. После кипячения дают воде остыть до 50-60 °С, посуду вынимают, тщательно прополаскивают в проточной водопроводной воде и ополаскивают дистиллированной водой.
Посуду с культурами перед мытьем предварительно стерилизуют в автоклаве при 120 °С в течение получаса, затем удаляет содержимое и моют, как указано выше. Иногда вместо стерилизации указанную посуду на 2-3 ч помещают в 5%-ный раствор соляной кислоты. Если посуда отмывается с трудом, ее следует обрабатывать в течение получаса хромовой смесью (на 1 л воды 50 г сухого двухромовокислого калия и 100 мл технической серной кислоты), затем тщательно промыть в воде с помощью ерша. Вместо хромовой смеси используют и 5-10%-ный раствор технической соляной кислоты - загружают в него на некоторое время посуду, а затем тщательно промывают.
Новую посуду кипятят в 1-2%-ном растворе соляной кислоты для нейтрализации избытка щелочи, возможно содержащейся в стекле. Затем тщательно прополаскивают в водопроводной и дистиллированной воде. Вымытую посуду сушат в сушильном шкафу. Для обесцвечивания несмывающейся краски употребляют 3%-ный раствор хлорной извести.
Посуду, применяемую для питательных сред, нельзя использовать ни для каких других целей, в том числе и для хранения дезинфицирующих веществ. Отмыть последние в дальнейшем почти невозможно. Примесь же дезинфицирующих веществ делает питательную среду совершенно непригодной для выращивания микробов.