Техника микроскопирования

Непременным условием получения отчетливого, резкого и ясного изображения микроскопируемого объекта является, как уже сказано, правильная установка освещения, а также правильный подбор окуляров и объективов.

Для установления правильного освещения: при работе с дневным светом открывают ирис-диафрагму, поднимают конденсор до уровня предметного столика и улавливают при малом увеличении плоской стороной зеркала лучшую освещенность поля зрения микроскопа; при искусственном освещении конденсор опускают настолько, чтобы изображение источника света находилось в плоскости препарата и было отчетливо видно в микроскоп.

При микроскопировании неокрашенных препаратов конденсор устанавливают, как выше описано, а ирис-диафрагму несколько суживают. Излишнюю яркость поля зрения можно ослабить также регулированием силы света лампочки осветителя, перемещая ручку реостата трансформатора и применяя светофильтр, либо опусканием конденсора. Следует помнить, что чем выше поднят конденсор, тем ярче будет освещено поле зрения микроскопа. Окрашенные препараты обычно рассматривают с иммерсионным объективом. Конденсор при этом должен быть поднят до предела, так как при микроскопировании с иммерсионной системой требуется особенно сильное освещение.

Для рассматривания препаратов при различных увеличениях пользуются разными сочетаниями окуляров и объективов. Выбор нужного увеличения определяется микроскопируемым объектом, целями исследования и разрешающей силой микроскопа. Под разрешающей силой микроскопа понимают то наименьшее расстояние между двумя точками препарата, изображение которых можно отчетливо различить при микроскопировании. Чем меньше это расстояние, тем больше разрешающая сила микроскопа. Предел разрешающей способности оптического микроскопа - 0,2 мкм - половина длины волны видимого спектра. Обусловлен он волновой природой света. Чем больше кривизна линз объектива (чем он сильнее), тем более мелкие объекты можно в этот объектив рассмотреть.

Объективы сухой системы имеют меньшую разрешающую способность, чем иммерсионные. Так, объектив с собственным увеличением 40Х дает возможность рассмотреть объекты размером не менее 0,85 мкм. Иммерсионный объектив 90X обычного биологического микроскопа позволяет увидеть объекты размером 0,45 мкм. У лучших современных оптических микроскопов, разрешающая способность иммерсионных объектов доведена до предела. Окуляры не открывают новых деталей в строении микробных клеток: они, увеличивая полученное от объектива изображение, дают возможность увидеть препарат тем крупнее, чем сильнее окуляр. Поэтому при микроскопировании дрожжевых клеток и плесневых грибов (как достаточно крупных объектов) можно пользоваться объективом 40 X. Для изучения бактерий следует применять иммерсионный объектив 90Х. Окуляры в обоих случаях можно использовать любые.

Процесс микроскопирования начинают с того, что на предметный столик микроскопа помещают приготовленный препарат и зажимают его клеммами. Наблюдая сбоку (глаза должны находиться на уровне предметного столика), опускают макрометрическим винтом (кремальерой) тубус микроскопа почти до соприкосновения объектива с покровным стеклом, а иммерсионный объектив погружают в каплю кедрового масла, нанесенную на высушенный окрашенный препарат.

Нельзя опускать объектив чрезмерно низко, а тем более давить им на стекло, так как при этом можно не только раздавить покровное (и даже предметное!) стекло, но и повредить фронтальную линзу объектива. В последнем случае объектив выбывает из строя. Особенно осторожно нужно опускать тубус микроскопа при работе с иммерсионным объективом, так как свободное рабочее пространство этого объектива составляет всего 0,15 мм.

После того как тубус будет опущен, смотря в окуляр, начинают медленно вращать макрометрический винт «на себя», до появления в поле зрения микроскопа контуров объекта (грубая наводка). Наиболее четкого и резкого изображения (фокусировки микроскопа) добиваются вращением микрометрического винта. Однако вращать микрометрический винт более чем на один-два полных оборота в ту или другую сторону не рекомендуется.

Если при вращении кремальеры изображение оказалось «пропущенным», нельзя, глядя в окуляр, быстро обратным вращением опускать тубус микроскопа вниз, так как можно раздавить предметное стекло и испортить объектив. В этом случае опять, смотря сбоку, нужно установить объектив в исходное положение и операцию фокусировки повторить сначала.

После работы иммерсионное масло с объектива удаляют чистой тряпочкой, фронтальную линзу объектива протирают маленьким ватным тампоном, слегка смоченным спиртом (пользуются и авиационным бензином), и вновь протирают сухой чистой тряпочкой. Удалять кедровое масло с объектива нужно легко, без давления. Хранить микроскоп следует в футляре либо закрывать его чехлом или стеклянным колпаком для предохранения от пыли.